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生物安全柜的試驗方法

        生物潔凈安全柜是當今微生物實驗室的必需品，尤其是那些需要操作人員采取防護措施的場合。如醫(yī)療、制藥、科研等，為細菌培養(yǎng)提供無菌、無塵、安全的工作環(huán)境。為了讓更多的用戶充分了解產(chǎn)品，接下來為您解析生物安全柜的測試方法。
         1. 一般要求
        1.1 測試條件
        “被測生物安全柜置于正常工作條件下"是指：生物安全柜在說明書規(guī)定的條件下工作。
         1.2 測試訂單
        試驗應按本標準 6.3 規(guī)定的順序進行。
         1.3 測試環(huán)境
        生物安全柜的性能測試應在符合以下環(huán)境要求的門口有正壓緩沖室的實驗室進行：
         a) 溫度：15~30℃；
         b) 相對濕度：不高 70%；
         c) 清潔度：自潔狀態(tài)下可達5級。
         1.4 電源
        1.4.1 電源電壓偏差：±3V；
         1.4.2 電源頻率偏差：±2Hz。
         2. 測試設(shè)備
        2.1 檢測設(shè)備應定期送至具有檢定（檢驗、校準）資質(zhì)的計量檢測機構(gòu)進行檢測，有效使用期限不超過一年。測試儀器經(jīng)檢定校準后方可投入使用。
         2.2 生物安全柜的測試需要以下設(shè)備：
         a) 氣溶膠發(fā)生器
        b) 粒子計數(shù)器（粒度分辨率從0.3μm或0.1μm開始）；
         c) 噴霧效率≥88%的噴霧器，滿足本標準附錄A的要求；
         d) 模擬干涉圓柱體（簡稱圓柱體），外徑為63mm，兩端封閉，長度由生物安全柜內(nèi)部尺寸確定，材質(zhì)為不銹鋼或鋁；
         f) 沖擊采樣器（毛細管直徑1.0mm，采樣量12.5l/min）；
         g) 間隙采樣器（采樣量為30l/min）；
         f) Φ90培養(yǎng)皿，培養(yǎng)基應含有營養(yǎng)瓊脂、大豆瓊脂或其他適合微生物生長的培養(yǎng)基，不含抑制劑或添加劑；
         g) 熱球風速計或氣流測試儀，測量精度為±0.01m/s；
         h) 微壓表，精度等級不低于1.5級；
         i) 干球溫度計，小單位分度為1℃；
         j）聲級計，測量范圍50~100dB，“A"計權(quán)方式；
         k) 照度計，可滿足1000lx以下照度的測量；
         l) 振動計，靈敏度小，振幅有效值達到2.5μm；
         m) 接觸電流測試儀；
         n) 微電阻測試儀；
         o) 耐壓測試儀，輸出交流有效值1500V，或直流2121V電壓，持續(xù)時間可在1~60s范圍內(nèi)設(shè)置。
        三、測試方法
        3.1 箱體檢漏
        去除被測生物安全柜的部分保護板或裝飾面板，露出箱體，將生物安全柜箱體形成一個獨立的封閉系統(tǒng)。
        將機柜加壓至 500Pa 并持續(xù)保持此狀態(tài)。將25g/L的肥皂液噴灑在箱體的焊縫、墊片、貫穿部位和密封部位，尋找泄漏點。
        注：可用中性洗滌劑稀釋10倍，作為皂液使用。
         3.2 過濾器泄漏檢測
        3.2.1 排氣過濾器泄漏檢測
        選擇以下方法之一進行排氣過濾器泄漏檢測：
         a) 只開排風扇，不開鼓風機，以保證生物安全柜吸入普通環(huán)境空氣，粉塵濃度不小于10000顆粒/L（≥0.5μm）。用粒子計數(shù)器的取樣口在排氣過濾器出風口面上方20mm處及框體間隙處進行檢漏掃描。掃描移動速度小于等于5-20mm/s，路徑應重疊。
         b) 氣溶膠發(fā)生器在排氣過濾器的上游，通過帶螺紋塞的穿透將氣溶膠引入待測生物安全柜的靜壓箱，氣溶膠靠近過濾器上游以測量氣溶膠濃度，至少有 3 個測量點，一個在中心，一個在距離兩側(cè) 50 mm 處。使用粒子計數(shù)器的采樣口在排氣過濾器出風口表面上方20mm處進行檢漏掃描。掃描移動速度≤5~20mm/s，路徑應重疊。
        如果檢漏標準是根據(jù)0.1μm來評估的，則只有方法b)適用。
        檢出粒子數(shù)應符合表4第2項的要求。
         3.2.2 送風過濾器泄漏檢測
        環(huán)境粉塵濃度≥10000個顆粒/L（≥0.5μm），送風面以下20mm處掃查檢漏，掃查移動速度≤5~20mm/s，路線應重疊。
        檢出粒子數(shù)應符合表4第2項的要求。
        3.3 清潔度
        被測生物安全柜在正常工作條件下放置30分鐘。
        清潔度測量邊界距離內(nèi)表面或前窗 150mm。
        粒子計數(shù)器的采樣口置于工作臺上方200mm高處，測量點布置如圖1所示。
        清潔度應符合表4中第3項的要求。
         3.4 人員安全
        3.4.1 儀器及采樣點布置（圖2）：
         a) 將裝有55ml枯草芽孢桿菌懸浮液（5～8×108/ml）的噴霧器放在安全柜的左右內(nèi)壁上為水平中心，水平噴射軸應距工作臺面向上350mm并平行到工作臺面。噴霧器的噴嘴應放置在距前窗內(nèi)側(cè) 100mm 處并面向前窗。
         b) 氣缸置于安全柜的中央，中心軸位于工作臺上方70mm處。筒體一端緊靠安全柜后壁，另一端應伸出安全柜前窗至少150mm。
         c) 氣瓶周圍有4個沖擊采樣器，采樣口位于安全柜前窗外63mm處。兩個沖擊取樣器的取樣口軸線相距150mm，與筒體頂部水平線相切。另兩臺沖擊取樣器的取樣口軸線相距50mm，與筒體底部水平線在同一水平線上。還有兩個沖擊取樣器，其取樣口的水平面位于工作臺上方360mm處，兩個取樣口的垂直軸距安全柜前窗外50mm處，分別位于150mm處在安全柜中心線的每一側(cè)。
         d) 設(shè)置兩個狹縫取樣器，取樣口所在的水平面為工作面，縱軸距安全柜前端外壁150mm，兩側(cè)距內(nèi)壁200mm .
         e) 作為陽性對照，在筒體中心軸下方、前窗進風格柵上方或下方10mm處放置帶支撐架的瓊脂培養(yǎng)皿，使其對進入格柵的氣流干擾小.
         3.4.2 抽樣程序
        緩沖間正常運行，開啟自潔系統(tǒng)，停止自潔系統(tǒng)直至環(huán)境潔凈度達到5級，生物安全柜運行30分鐘后開始測試。
        測試時長為30min，采樣流程如表5所示：
        表 5 取樣程序
        3.4.3 細菌培養(yǎng)
        使用直徑為47mm，孔徑為0.22μm的膜過濾器該薄片過濾了撞擊器采樣的所有液體。在無菌狀態(tài)下，取下過濾器并將其放入具有合適培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中。裝有過濾器的培養(yǎng)皿、帶有兩個狹縫取樣裝置的培養(yǎng)皿和對照培養(yǎng)皿在37℃培養(yǎng)24至28小時后進行測試。如果培養(yǎng)皿為陰性，則在 44~48h 后重新孵育并讀取。
        對照菜應為陽性。當對照培養(yǎng)皿中含有≥300 個枯草芽孢桿菌菌落時，稱為陽性。
        按6.3.4.2和6.3.4.3的程序進行3次試驗。
         6.3.4.4 新產(chǎn)品或有較大改動設(shè)計的生物安全柜，應按6.3.4.2和6.3.4.3的程序在下列條件下重復試驗：
         a) 吸入口風速偏離標準風速-0.05±0.015 m/s，供給風速偏離標準風速+0.05±0.015m/s；
         b) 吸入風速偏離標準風速–0.05±0.01m/s，送風速度偏離標準風速–0.05±0.01m/s。
         3.4.5 試驗結(jié)束后，對環(huán)境中的所有表面進行擦拭消毒。
         3.5 受試樣品的安全性
        3.5.1 儀器及采樣點布置：
         a) 將裝有55ml孢子懸液（5～8×106/ml）的噴霧器安全放置在機柜的水平中心，水平噴霧軸應距工作臺面200mm以上，并與工作臺面平行。噴霧器的噴嘴應放置在距前窗外側(cè) 100mm 處并面向前窗。
         b) 氣缸置于安全柜的中央，中心軸位于工作臺上方70mm處。筒體一端緊靠安全柜后壁，另一端應伸出安全柜前窗至少150mm。
         c) 將瓊脂培養(yǎng)皿鋪在工作臺面上，然后將培養(yǎng)皿蓋一一打開。
         d) 作為陽性對照，在圓柱體中心軸下方放置一個帶支撐架的瓊脂培養(yǎng)皿，位于前窗進氣格柵上方或下方10mm處，使其對氣流的干擾很小進入格柵。
         3.5.2 抽樣程序
        緩沖間正常運行，開啟自潔系統(tǒng)，待環(huán)境潔凈度達到5級后，停止自潔系統(tǒng)，生物安全柜運行30分鐘后開始測試。
        噴涂機運行 5 分鐘。噴霧器停止 5 分鐘后，蓋上瓊脂培養(yǎng)皿。
         3.5.3 細菌培養(yǎng)
        培養(yǎng)皿在37℃培養(yǎng)24~28h后進行檢測。如果培養(yǎng)皿為陰性，則在 44~48h 后重新孵育并讀取。
         37℃培養(yǎng)24~28h后，對照培養(yǎng)皿應呈陽性。當對照培養(yǎng)皿中含有≥300 個枯草芽孢桿菌菌落時，稱為陽性。
        應按6.3.5.2和6.3.5.3的程序進行3次試驗。
         3.5.4 新產(chǎn)品或有較大改動設(shè)計的生物安全柜，按6.3.5.2和6.3.5.3的程序在下列條件下重復試驗：
         a) 吸入口風速偏離標準風速-0.05±0.015 m/s，供給風速偏離標準風速+0.05±0.015m/s；
         b) 吸入風速偏離標準風速–0.05±0.01m/s，送風速度偏離標準風速–0.05±0.01m/s。
         3.5.5 試驗結(jié)束后，對環(huán)境中的所有表面進行擦拭消毒。
         3.6 交叉感染
        3.6.1 設(shè)備及采樣點布置（圖5）：
         a) 裝有55ml枯草芽孢桿菌懸浮液（5～8×104/ml）的噴霧器，水平噴霧軸在工作臺頂部76～127mm，與工作臺面平行。噴霧器背面靠近左（右）內(nèi)壁的氣流接口，噴嘴正對著右（左）內(nèi)壁。
         b) 瓊脂培養(yǎng)皿按以下方法排列：
        噴頭下方放置兩個對照培養(yǎng)皿，距右（左）內(nèi)壁360mm處布置一排培養(yǎng)皿。安排一到兩排培養(yǎng)皿。
         3.6.2 抽樣程序
        緩沖間正常運行，開啟自潔系統(tǒng)，停止自潔系統(tǒng)直至環(huán)境潔凈度達到5級，生物安全柜運行30分鐘后開始測試。
        噴涂機運行 5 分鐘。噴霧器停止 15 分鐘后，蓋上瓊脂培養(yǎng)皿。
         3.6.3 細菌培養(yǎng)
        培養(yǎng)皿在37℃培養(yǎng)24~28h后進行檢測。如果培養(yǎng)皿為陰性，則在 44~48h 后重新孵育并讀取。
        對照培養(yǎng)皿在37℃培養(yǎng)24~28h后應呈陽性。當對照培養(yǎng)皿中含有≥300 個枯草芽孢桿菌菌落時，稱為陽性。
        應按 3.6.2 和 3.6.3 三項試驗的程序。
         3.6.4 新產(chǎn)品或有較大改動設(shè)計的生物安全柜，按6.3.6.2和6.3.6.3的程序在下列條件下重復試驗：
         a) 吸入口風速偏離標準風速-0.05±0.015 m/s，供給風速偏離標準風速+0.05±0.015m/s；
         b) 標準風速為–0.05±0.01m/s，供給風速偏離標準風速–0.05±0.01m/s。
         3.6.5 試驗結(jié)束后，對環(huán)境中的所有表面進行擦拭消毒。
         3.7 供給風速
        垂直氣流的平均風速是在工作臺面上方300mm的平面區(qū)域內(nèi)測量的，該區(qū)域距離內(nèi)墻板和前窗100mm。
        測點服從行列150m的網(wǎng)格分布。如果去除測量邊界后凈尺寸不等于15的整數(shù)倍，則允許校正測量點之間的距離，但每列至少測量3個點，至少測量7個點每一行。
        送風速度是每個測量點讀數(shù)的算術(shù)平均值。